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转基因技术是防止Ti质粒和什么自身环化?
1、转基因技术是利用现代生物技术，将人们期望的目标基因，经过人工分离、重组后，导入并整合到生物体的基因组中，从而改善生物原有的性状或赋予其新的优良性状。
2、转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术(Transgenic technology)。人们常说的遗传工程、基因工程、遗传转化均为转基因的同义词。
3、除上述以Ti质粒为载体的基因转化外，还可以用脂质体(liposome)为载体进行遗传转化。脂质体是由磷脂组成的膜状结构，因此可将DNA分子包装在脂质体内以避免受体细胞DNase的降解，把DNA分子导入到植物的原生质体中去。
4、根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。
5、（2）采用同聚物加尾连接技术，可自动防止线性载体DNA 分子的自身环化作用，这是因为切割后形成的线性DNA 分子的两个3-OH末端，此时都已被加上具有同样碱基结构的同聚物尾巴。
高考生物:2009年江苏高考第34题,有关于限制酶切割形成重组质粒
）质粒被切开一个口（2个粘性末端）2）线性片段被切开成三段（自己试试画一下）只有中间那段具有粘性末端，才能和质粒重组。将1）和2）混在一起，粘性末端互相连接，只能形成一种重组质粒。
表示HindIII与Bam I酶切可获得 1种重组质粒；如果换用Bst l与BamH l酶切，目的基因与质粒连接后可获得2种重组质粒。
我也是09届的，第一题酶切后可能只有一个位点断开，也可能两个位点都断开。
将目的基因导入植物细胞采用最多的是农杆菌；两种限制性内切酶切割重组质粒得到DNA片段的种类。2009年第34题中第(1)(2)小题考查了两种不同的限制性内切酶切割目的基因和质粒后可得重组质粒的种类。
再用DNA连接酶连接可得到两种重组质粒。但是，显然原答案是没有考虑正反接的。
有时也可以用不同的限制酶切割，因为有时不同的限制酶切割也能形成相同的黏性末端，经DNA连接酶连接也能形成重组质粒。故选B 考点：本题考查限制酶的相关知识。点评：本题意在考查考生的理解判断能力，属于中等难度题。
质粒自身坏化
1、简单来说就是DNA在连接酶的作用下，自身的两头或中间序列又正好能配对，就自己形成了一个环状的DNA，就像一根线，中间打了个结，中间会有一个环状的结构，两边还是线性的DNA。
2、然后，把切好的质粒和目的基因放到一起进行连接。在此过程中，质粒不一定就和目的基因连接上，它也有可能会自己再重新连接上对不对？这就叫质粒的自身环化。这样的话我们就没能把目的基因导入载体质粒中。
3、目的基因自身环化，则这个环上不含有复制起点、标记基因 ，无法进行扩增和筛选；质粒自身环化，则环上不含有目的基因，为空载体，是无用的。所以，必须保证目的基因和 质粒载体 二者正确连接、环化。
4、一般做克隆载体都会用两种相同的酶分别酶切载体和片段，然后再连接。用一种酶的也行，但就像你说的会环化，这种重组效率比前面一种更低。
质粒转化步骤
)取100ul新鲜制备的感受态细胞，加入质粒1ul DNA混匀，同时设置对照组(未加质粒，未加受体菌，已知具有转化活性的DNA)。冷冻的感受态细胞要在冰上解冻，待管中最后一点冰融化后，迅即加入DNA. 解冻感受态细胞温度高于0℃，会降低转化效率。
如果是穿梭质粒的话，提取出来直接转化感受态的农杆菌就好。步骤：农杆菌感受态细胞的制备 挑取少许农杆菌，接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中，28℃、200r/mim培养过夜。
转化的质粒 DNA 的质量和浓度。试剂的质量。防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。
质粒转化大肠杆菌实验
实验2质粒转化大肠杆菌目的1．重组质粒的鉴定当质粒的重组或其它载体重组后，通常会发生质粒的重组失败，包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选，把重组成功的质粒找出来。
大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。
制备含有Amp抗生素的LB平板。 取一个5ml离心管，加入100μl感受态细胞悬液，置冰上：加入20ul质粒T+G(提取的质粒DNA稀释500X)，用移液器轻柔混匀。冰上静置20min。
学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。
到此，以上就是小编对于质粒活化步骤的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
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