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SDS-PAGE电泳跑的图都花了,条带也歪了,MARKER也歪了。大概是什么原因啊...
电泳槽放置不水平:如果电泳槽放置不水平,会导致电泳时Marker的分离效果受到影响,从而出现歪斜的情况。
跑电泳时条带走歪了可能有以下原因: 电泳条件问题:电泳的电压、电流、温度等条件可能会影响条带的迁移和分离效果。如果电泳条件不当,可能会导致条带歪曲。
电泳条带出现斜的最主要有以下几个原因,供你参考。第一,所配制的胶有问题。比如:配方有没有错、浓度有没有错或者高低。凝固时间是否合适。第二,所配的电泳缓冲液问题。比如,配方浓度等是否正确。
条带的歪斜和上样量有一定关系,各个泳道上样量不一致可能导致条带的歪斜。再就是看看你的电泳缓冲液是否时间长了,一般电泳缓冲液用3~5次就要换新的。凝胶的配置要注意pH值和混合均匀,如果胶不均匀,也会影响条带。
SDS-PAGE蛋白质电泳问题
1、SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种常用于蛋白质分析的电泳技术。
2、SDS-PAGE电泳是一种将蛋白质按照分子量大小分离的方法,通常需要使用染色方法(如Coomassie blue染色)来观察电泳条带。如果某些样品在电泳后看不到条带,则可能是由于样品中蛋白质浓度太低或者电泳条件不合适导致的。
3、,浓缩胶的要求就是将所有蛋白在浓缩胶和分离胶梯度的时候将所有蛋白压缩成一条线,保证他们在同一起跑线上。如果蛋白样品是不同时间的同一种,可能就是浓缩胶没摇匀。至于加样散,原因就可能是胶质不均了。
配制sds-page凝胶需要注意什么
1、进行SDS凝胶电泳实验时,有几个重要的注意事项需要遵守:安全操作:确保实验室工作区域整洁,穿戴适当的个人防护装备,如实验手套和实验衣物。遵守实验室安全操作规程,特别是在使用有毒化学物质时要小心。
2、⑨ 卸下胶板,剥离胶放入染色液中,室温染色1~2 hr;加入脱色液,置于80 rpm脱色摇床上,每20 min更换一次脱色液(10 ml 冰乙酸;45 ml乙醇;45 ml蒸馏水)至完全脱净。
3、SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制,也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。
4、.用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时,必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。并且sDs—PAGE 测定分子量有10%误差,不可完全信任。
5、加样时要注意:每空的上样量不能过大,以免样品溢出,造成各泳道相互污染;为了避免边缘效应,在未加样的泳道加入等量的样品缓冲液。
6、问:SDS-PAGE胶不凝?1)、先确定AP、TEMED的量都没问题,应该有各浓度的配方的,加少了或者没加的话就不会凝了;2)、温度和湿度太大,也会影响胶的凝固。
到此,以上就是小编对于sds跑胶时间的问题就介绍到这了,希望介绍的几点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。