本篇目录：
- 1、wb实验的原理和步骤
- 2、琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子的实验步骤大体有哪几步
- 3、琼脂糖凝胶电泳具体操作步骤是什么?需要注意什么事项?
- 4、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的电泳实验步骤
- 5、聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作过程中,应注意哪些事项?
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上，再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原。
wb的实验步骤 制样：裂解缓冲液或者超声处理。(使用RIPA裂解液是需按照100：1加入蛋白酶抑制剂)。电泳：根据蛋白大小确定合适的PAGE胶浓度，推荐上样量为20-30ug总蛋白。转膜：湿转和半干转都可。
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。
基本原理是将目标蛋白从复杂的混合物中分离并电泳到聚丙烯酰胺凝胶上，将电泳分离的蛋白转移到膜上，通过特异性抗体的识别来检测目标蛋白的表达水平。下面是WB实验的一般流程及注意事项。
加入一抗（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部），4℃ 放置12hr以上。阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同。弃一抗和1%BSA，用0.01M PBS分别洗膜，5min×4次。
琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子的实验步骤大体有哪几步
操作步骤：电泳方法 一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链、开环。
琼脂糖凝胶电泳具体操作步骤是什么?需要注意什么事项?
注意事项如下：缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。
根据片段大小配制不同浓度的胶（改变分辨率），片段越小，需要胶浓度越大。 胶要现制先用。 选择合适的Marker。 配胶的缓冲液与电泳缓冲液要是同一种，且浓度一致（1倍）。
凝胶电泳制胶过程具体步骤如下：制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml，小胶用50ml)：称取0。7g(0。5g)琼脂糖置于锥形瓶中，加入70ml(50ml)1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1。
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的电泳实验步骤
1、清洗干净两块玻璃板，晾干后按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。 将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角。把玻璃板在灌胶支架上固定好。
2、．样品的浓缩效应以往不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，pH3)、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，pH8)、分离胶缓冲液(Tri s—HCl， pH8)，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。
3、玻璃板浸泡在重铬酸钾洗液3～4h或0.2mol/L KOH的酒精溶液中20min以上，用清水洗净，再用泡沫海绵蘸取“洗洁净”反复刷洗，最后用蒸馏水冲洗，直接阴干或用乙醇冲洗后阴干。
4、分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳（agarosegelelectrophoresis）分离，也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。
5、pAGE：既然浓度已经决定了 那么凝胶形成的孔径也就固定不变了。电泳中大分子跑的慢，小分子跑得快 因此蛋白质得以分离。步骤：还是自己查，网上和一半生化书上很多的 这里难以说清楚。因为步骤很详细。
6、体积比）；6．操作步骤 （1） 将表达后的菌体与2上样缓冲液按1：1混匀于微量离心管中。（2） 用超声波破碎仪脉冲10次，每次10秒。中间间隔时放入冰中降温。
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作过程中,应注意哪些事项?
．SDS与蛋白质的结合按质量成比例(即：4g SDS /g蛋白质)，蛋白质含量不可以超标，否则SDS结合量不足。2．用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。
垂直胶的点样孔形成于两块玻璃板之间。在非常薄的胶中，移液器移液头甚至不能插入到两块玻璃板之间。注意甘油！把移液头置于样品孔上方，样品会沉入到孔中。点样之前，一定要把垂直型聚丙烯酰凝胶的点样孔冲洗干净。
需要注意的有：密封条要封好，不能漏水；灌胶时用移液管，可以慢一点，并水平移动，防止凝胶不均匀，凝胶不会很快凝固，所以不用担心；灌胶时不能有气泡产生，否则会影响后面凝胶的效果。
进行SDS凝胶电泳实验时，有几个重要的注意事项需要遵守：安全操作：确保实验室工作区域整洁，穿戴适当的个人防护装备，如实验手套和实验衣物。遵守实验室安全操作规程，特别是在使用有毒化学物质时要小心。
凝胶配制一定要迅速，催化剂要在注胶之前加入，否则凝胶凝结无法注胶。注胶最好一次性完成，避免产生气泡。样疏需一次性平稳插入，书口处不得有气泡，疏底需水平。
凝胶电泳操作注意事项： 缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。
到此，以上就是小编对于凝胶电泳过程中为什么不用甲基绿染色的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
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