本篇目录：
...肝脏或者肾脏细胞时,提取的组织剪碎后,怎么用PBS清洗,直至组织发白...
将样品放入PBS缓冲溶液中剪碎，倒掉变色的溶液，换入新的PBS，继续剪，一遍一遍地重复，直到PBS溶液不变色为止。比如肝脏组织，洗完后整个是一个偏黄色的组织。
用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤，剖腹取出肝脏或肾脏。置于无菌平皿中。
是的，每100mg固体组长组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm左右的小块，用PBS洗涤两次，离心取沉淀后加入1mL冷溶液A和10uL溶液B，4度下玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50次。
过滤后的细胞悬液通过4℃ 300g离心 5min 收集；后再使用0.5 mL的PBS （含1% BSA）重悬细胞，置于冰上保存。
组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M， pH=4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。
流式细胞术实验步骤是什么?
一 、细胞表面标记的检测 试剂平衡至室温。准备：消毒台面；穿戴工作服，帽子，口罩和手套，放置棉签，草纸和有盖垃圾桶（内装有消毒剂）。写编号纸并编号。
，加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。5，加入1mlPBS洗两遍（3500rpm，4度，离心）。6，用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上级检测。
流式细胞术的基本步骤包括：细胞样品的制备：将需要进行分析和排序的细胞样品制备成单细胞悬液，保证细胞在流式细胞仪中流动时不会聚集在一起。
抽血，抗凝 加一抗：CD62p-FITC单克隆抗体，和抗CD63-非FITC标记（比如APC标记），推荐浓度1：200稀释，室温孵育15分钟。PBS洗2次。
定量细胞浓度 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组 两组都先加入非特异性的IgG，封闭可能的Fc受体 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。
通常使用Annexin V-FITC / 7-AAD 对凋亡细胞进行染色，用流式检测阳性染色数，计算IC50。本人最近在养HUVEC，并检测某种药物的IC50，记录一下步骤。
ChIP超详细实验步骤
留取300μl 做实验，其余保存于-80℃。
g.进行超声打断；不同细胞系所需的超声处理时间不同，因此这一步骤需要优化。
HOMER主要被用于 ChIP-Seq 和 promoter 分析，但是核酸序列motif寻找问题都可以尝试使用HOMER。
chip实验中取出1平皿细胞，加入243ul37%甲醛，使得甲醛的终浓度为1%，培养基共有9ml，温度设置37摄氏度孵育10min。
ChiTag酶在打断基因组的同时加上接头，不需要繁琐的补平加A加接头，在一天内可以完成从细胞到测序文库制备全流程。
CHIP常见用途 DNA甲基化 脊椎动物的DNA甲基化一般发生在CpG位点(胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤位点，即DNA序列中胞嘧啶后紧连鸟嘌呤的位点)。经DNA甲基转移酶催化胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶。
到此，以上就是小编对于pbst洗细胞的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
微信扫一扫打赏
