本篇目录:
- 1、如何去除DNA中的RNA?
- 2、前导链的RNA引物如何消除?
- 3、如何去除质粒提取中的RNA杂质质粒DNA琼脂
- 4、真核细胞DNA前导链合成后,RNA引物是由哪个酶去除的,去除引物后的前导...
- 5、DNA复制时RNA引物是怎么切除的
如何去除DNA中的RNA?
可采用室温离心而非4度,RNA自然降解;如果还不行的话,可在操作过程中加入1-2微升的RNase,也无需专门37度水浴,室温操作,问题自然解决。
DNA中混有RNA和蛋白质,去除方法:1,首先溶解样品。2,加氯仿,15000rpm 4度 15分钟离心。3,上层(水层RNA),中间层(半固体),下层(有机溶剂层DNA,加乙醇可沉淀出来)。
你看一下溶液的PH值是不是没调好,可能PH值小了吧,核酸的水解性质是:RNA对酸不敏感但遇碱水解,DNA遇碱不水解但遇酸水解。当然前提是你要确定没往里误加DNases(脱氧核糖核酸酶)把DNA给水解了。
DNA样品中加适量RNA酶(0.1~0.3ul) 37 ℃水浴保温30min。DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定。DNA溶于酚但是RNA不溶。
在使用Trizol试剂进行DNA提取时,可以通过调整实验步骤和加入适当的试剂来去除RNA。一般而言,使用酒精沉淀法可以去除RNA。具体实验步骤可以参考相关文献或手册。
前导链的RNA引物如何消除?
1、DNA聚合酶Ⅰ会切除RNA引物的 DNA聚合酶Ⅰ除具有5→3 DNA聚合酶活性外,还有5→3和3→5的外切核酸酶活性。考虑冈崎片段,每段RNA引物总是能被它上游的3→5移动的 DNA聚合酶Ⅰ遇到的。
2、正常情况下无法填补修复。前导链在DNA的合成过程中引发一次,然后连续合成与其互补的子代链,而后随链需要引发多次。前导链和后随链都需要由引发酶合成的RNA做引物。
3、染色体复制时前导链和滞后链的引物RNA去掉与端粒酶没有任何关系。在人的正常组织细胞中一般不表达端粒酶,或者处于无活性状态。端粒酶由RNA和蛋白质组成。是一种逆转录酶。一般存在于癌细胞中。
如何去除质粒提取中的RNA杂质质粒DNA琼脂
1、通过下述方法,可以从质粒制品中去除RNA。通过Bio-Gel A-150m或Sepharose CL-4B进行层析 制备质粒DNA。 有等体积的经TE(pH0)平衡后的酚抽提1次。
2、一般在solution I里加入RNase 的。已经提取出来的质粒有RNA污染,如果直接加RNase消化RNA,则在消化后应该使用氯仿抽提去除RNase。然后再使用醋酸钠/异丙醇沉淀回收质粒。其实现在质粒提取kit很简单、经济,重新抽过质粒就是了。
3、加入无DNase的RNase处理,一般37C 30min-1h,再纯化就可以了。
真核细胞DNA前导链合成后,RNA引物是由哪个酶去除的,去除引物后的前导...
切除引物是用RNA酶,因为DNA合成的引物是RNA而不是DNA,RNA酶可将其水解,然后留下空隙,再用DNA polⅠ催化,以dNTP为原料,生成相当于引物长度的DNA链,最后由DNA连接酶将DNA片段链接形成完整的子链。
由DNA聚合酶I(DNA Pol I)结合在这个Nick上——其实DNA Pol I最重要的就是这个工作——,由于在DNA Pol I内存在5‘至3’的核酸外切酶活性,所以可以一边水解RNA片段,一边将对应的脱氧核糖核苷酸加上去、聚合。
原核生物DNA复制的引物直接由DNA聚合酶I切除;真核生物DNA复制的引物有两套切除机制,分别是RNAas H I/FEN1切除机制和Dna2/FEN1切除机制。
真核生物的引物切除依靠的是FEN1,FEN1有核酸内切酶和5-3核酸外切酶活性。而且去除引物还需要PCNA和解旋酶Dna2的协助。
:是DNA-POL1切除的。RNA水解酶只作用于RNA。原核生物DNA复制过程中的RNA引物这时还是在DNA链上的,不算严格的RNA,况且引物也可以使小片段的DNA。2:第一它没有额外的引物,DNA聚合酶必须要引物。
DNA聚合酶I能水解RNA和DNA,却只能合成DNA,所以最后总是会把RNA引物给水解掉的。据百度百科说RNA引物非常短,一般只有3-5个核苷酸长。
DNA复制时RNA引物是怎么切除的
1、DNA聚合酶Ⅰ会切除RNA引物的 DNA聚合酶Ⅰ除具有5→3 DNA聚合酶活性外,还有5→3和3→5的外切核酸酶活性。考虑冈崎片段,每段RNA引物总是能被它上游的3→5移动的 DNA聚合酶Ⅰ遇到的。
2、大体就是,在复制结束之后,会存在一段DNA-RNA的杂交片段,由于RNA是作为引物初始引入的,所以跟5上段会存在一个缺口(Nick),这个Nick其实就会引发类似DNA damage repair的反应。
3、对引物进行酶切就是:切除引物是用RNA酶,因为DNA合成的引物是RNA而不是DNA,RNA酶可将其水解,然后留下空隙,再用DNA polⅠ催化,以dNTP为原料,生成相当于引物长度的DNA链,最后由DNA连接酶将DNA片段链接形成完整的子链。
4、原核生物DNA复制的引物直接由DNA聚合酶I切除;真核生物DNA复制的引物有两套切除机制,分别是RNAas H I/FEN1切除机制和Dna2/FEN1切除机制。
5、即 DNA-POL 1 他是多功能E 有3-5外切。5-3合成活性、修复DNA,切除RNA引物作用。
6、一旦DNA局部双链解开,就必须有ssbDNA蛋白以稳定解开的单链,保证此局部不会恢复成双链。两条单链DNA复制的引发过程有所差异,但是不论是前导链还是后随链,都需要一段RNA引物用于开始子链DNA的合成。
到此,以上就是小编对于去除rna引物的酶的问题就介绍到这了,希望介绍的几点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。